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高效液相色谱仪性能的测试方法

文章出处:博王软件计划官网 人气:发表时间:2020-07-05 23:22

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  室内避免易燃、易爆和强腐蚀性气体及强烈震动、电磁干扰,有良好的通风装置。

  试验用计量仪器、仪表和玻璃器皿等均按有关规定,经计量检定单位检定合格并满足量程和精度的要求;

  标准溶液与试剂:标准溶液应使用满足相关标准的有证标准物质,并按照相关要求配制,各种试剂应使用优级纯或分析纯。

  高压截止阀一个,耐压不小于仪器压力上限 120%;精密压力表一个,量程不小于仪器压力上限的 120%,0.4 级;三通一个;秒表一块,分度值不大于 0.1 s。

  纯水:二次蒸馏水,满足《GB/T 6682-2008 分析实验室用水规格和试验方法》中一级水要求,以下同。

  通过三通将恒流泵、高压截止阀和精密压力表连接,恒流泵最高压力设定为仪器压力上限90%处。以纯水为流动相,待系统排出气体,流量设置为 0.1 mL/min;运行仪器,将高压截止阀处于截流状态,压力将逐渐上升,达到仪器压力上限 90%时,停止运行;记录此时压力表示值 p1,保持 10min 后,记录压力示值 p2。按式(4-1)计算压力降。

  秒表一块,分度值不大于 0.1 s;带探针数字温度计一支,分度值不大于 0.1℃;分析天平一台,根据流量大小选择合适载荷,测试质量控制在天平载荷的 60%左右,准确度不低于 II级,实际分度值不大于 0.1 mg;背压装置一个,在设定流量下可提供(8±2)MPa 背压;合适规格的称量瓶三个。

  连接恒流泵入口、出口管路,以纯水为流动相(将数字温度计探针插入流动相内,测定此时流动相的温度),分别设定仪器流量上限的 1%、10%和 50%,调整背压在(8±2)MPa。待仪器运行稳定后,按照表 1 要求收集流动相,采用秒表计时,记录数据。分别按照式(4-2)、式(4-3)计算流量准确度和精密度。

  注:流量的设定可根据恒流泵的流量范围而定,此处以流量上限为10 mL/min为例。

  注:为方便起见,亦可采用检定合格的液体流量计(精度不低于0.01 mL/min)测试流量准确度与精密度。

  精密压力表一个,量程不小于仪器压力上限的 120%,0.4 级;背压装置一个:在设定 1.0 mL/min 流量下,在 0~30 MPa 范围内可调;秒表一块,分度值不大于 0.1 s。

  依次连接恒流泵、精密压力表、背压装置入口与出口管路,以纯水为流动相,设定流量为仪器流量上限的 10%,调整背压为仪器压力上限的 20%左右(如仪器压力上限为 40 MPa,则背压调整在(8±2)MPa;如仪器压力上限为 100 MPa,则背压调整在(20±2)MPa)。待仪器运行稳定后,监测精密压力表示值,记录 10 min 内的最大、最小压力值及平均值(每间隔 1 min 读数一次,计算平均值)。按照式(4-4)计算压力脉动率δp。

  分析天平一台,准确度不低于 II 级,实际分度值不大于 0.1 mg;2 mL 样品瓶若干。

  启动自动进样器,排除管路气泡,清洗进样针,取 2 mL 的进样瓶,加入一定量的纯水,用分析天平称量,记录数据。按表 2 执行取样,每次取样结束后,均对进样瓶进行称量,记录数据。按式(4-5)和式(4-6)进行计算 SS 和 SR,作为进样准确度与精密度*。

  同 4.2.1.2,依次设定进样体积为 5uL,10uL,20uL,25uL,50uL(如样品环体积为 100 uL),每个体积连续测量三次,记录数据,取算术平均值 m,与对应的取样体积作一元线性拟合校准曲线,得出线性相关系数 r。

  高效液相色谱仪系统一套,C18 色谱柱一支(满足《GB/T 30433-2013 液相色谱仪测试用标准色谱柱》标准要求,理论塔板数不低于 18000,以下同)。

  将自动进样器连入测试用高效液相色谱仪系统中,采用 C18 色谱柱连接自动进样器出口与检测器入口,启动仪器,设置检测器波长为 254 nm,以 85%甲醇水溶液为流动相,流量设定为 1.0 mL/min,平衡系统。启动进样器,排除管路气泡,清洗进样针,取 2 mL 的进样瓶,加入一定量的 0.1 mg/mL 的萘/甲醇溶液,放入自动进样器托盘指定位置。设置自动进样器参数,进样前后各清洗 1 次(清洗体积为系统体积的 3~5 倍),依次注入 20uL 的 0.1 mg/mL 的萘/甲醇溶液和 100%甲醇溶液。重复测量三次,记录色谱峰面积,取算术平均值,按式(4-7)计算残留量。

  在色谱数据工作站上设定分析方法,编辑序列,进样量设为 20uL,选择不洗针模式,点击运行序列,同时用秒表计时,至完成进样,色谱工作站开始采集数据为止,记录此过程的时间为最小进样时间。

  将数字温度计探针放置在一支空色谱柱的中心,将空色谱柱固定在色谱柱温箱内放置色谱柱处,选择 4℃(制冷 1)、室温+10℃,40℃,温度上限的 90%进行测量。按温度从低到高顺序升温,开机加热或制冷 60 min 后,每隔 5 min 记录一次数字温度计显示温度 2,测试五次计算平均值。按照公式(4-8) 和( 4-9)计算温度准确度与精密度。

  注1:如色谱柱恒温箱具有制冷功能时,才需测试; 注2:亦可通过计算机软件实时检测温度变化曲线,待仪器稳定后,记录温度曲线,计算温度准确度与精密度。

  按照表3要求,设定仪器参数,连接测试系统。开机预热60 min后,记录基线 min内平行包络线的中心线的起点与终点的差值作为检测器的基线所示);选取所记录基线 min作为计算噪声的基线 min为界画平行包络线)计算短期基线个包络线宽度的平均值,作为检测器基线噪声。

  色谱数据工作站一套;二元梯度系统一套(梯度误差不大于±1%)或1 mL注射器一支;试剂:按照表4配制标准样品。

  将检测器与二元梯度系统,以及色谱数据工作站连接好,按照表3设置仪器参数。开机预热后,以甲溶液为流动相A注入,1.0 mL/min的流量平衡系统,冲洗流通池至示值稳定后归零。然后以乙溶液为流动相B注入流通池,检测器示值稳定后记录响应信号值,重复测试三次,取算术平均值。然后按式(4-11)计算信噪比(S/N),噪声计算方法参照4.4.1.1。

  色谱数据工作站一套;1 mL 注射器一支;试样:按照表 4 配制 1 个空白甲溶液,配制 10个系列浓度丙溶液。如紫外-可见检测器配制试样甲溶液:纯水;试样丙溶液:丙酮水溶液浓度依次为 0.1%、0.2%、0.3%、、1.0%。

  将检测器和色谱数据工作站连接好,按照表3设置仪器参数。开机预热后,用注射器直接向检测池内注入表4甲溶液,冲洗检测池至示值稳定后将检测器回零。然后向检测池内依次注入表4乙溶液,充满检测池并使示值稳定,记录各浓度下的响应信号值,每个浓度重复测试三次,取算术平均值。以前五个浓度点和对应响应信号值作标准曲线,计算出后五点的理论响应值,与对应含量的响应信号值比较,响应信号值刚好大于计算值5%时,认为曲线弯曲,此点浓度作为线性上限CH。 CL值测定(信噪比推算法): 以4.4.1.2测得结果线时对应的浓度,即作为线性下限CL。

  最后,由CH/CL算出检测器线性范围,CH值测定时标准曲线斜率作为检测器灵敏度。

  将检测器和色谱数据工作站连接好,开机预热稳定后,将氧化钬滤光片放置在流通池处或将0.4%氧化钬的10%高氯酸溶液注入流通池进行光谱扫描,重复测试三次,记录并保存,计算谱线波峰的波长示值与特征波长值之差。按照此法依次检验各个特征波长的示值误差,取其中最大值作为检测器波长准确度。计算重复三次中最大值与最小值之差作为检测器波长精密度。

  色谱数据工作站一套;1 mL 注射器一支或恒流泵一台;0.872 mg/mL 丙三醇水溶液(对应响应值为 1×10-4RIU)和 0.436 mg/L 丙三醇水溶液(对应响应值为 5×10-5RIU).纯水。

  将检测器和色谱数据工作站连接好,开机预热,首先将纯水注入参比池和样品池,冲洗稳定后归零;然后将 0.436 mg/L 和 0.872 mg/L 丙三醇水溶液依次注入样品池,示值稳定后,记录响应值,重复三次取算术平均值,最后与标准值比较,计算 RIU 与 mV 的对应关系。

  将检测器和色谱数据工作站连接好,开机预热稳定后,向检测池内注入纯水,待检测器示数稳定后,分别设定纯水拉曼光谱的激发/发射特征波长为 350 nm/397 nm,进行激发和发射光谱扫描,重复测试三次,记录并保存光谱图。按照此法依次检验各个特征波长的示值误差,取其中最大值作为检测器波长准确度。计算重复三次中最大值与最小值之差作为检测器波长精密度。

  另外,亦可采用1×10-4 mg/mL萘甲醇溶液测试,激发/发射特征波长为290 nm/330 nm。

  色谱数据工作站一套,阻尼管或测试用 C18 色谱柱一支(理论塔板数不低于 18000);

  按照表 3 要求,设定仪器参数,连接测试系统。启动系统,以甲醇或纯水为流动相,流量为 1.0 mL/min(对 UHPLC,流量为 0.2 mL/min),平衡稳定 60 min 后,记录基线 方法,计算动态基线 梯度准确度与精密度

  色谱数据工作站一套,紫外-可见检测器一台,两通一个,背压装置(10±2)MPa 一套。丙酮(分析纯),纯水;流动相:A,纯水;流动相 B,0.1%丙酮/水溶液。

  通过两通和背压装置将梯度系统与检测器相连,检测器波长设置为 254 nm;色谱数据工作站与梯度系统、检测器信号输出端连接,按图3设置梯度参数。恒流泵总流量设为1.0 mL/min,待仪器稳定后,开始采集数据,得到梯度曲线。测量各种溶液配比时的输出信号值,用公式(5-1)计算各种溶液配比时的梯度误差,取其中最大者为梯度准确度,重复三次,按照公式(5-2)计算梯度精密度。对于四元梯度系统采用同样的方法分别测定 AB、AC、CD 、BC、BD 五组台阶梯度,每组重复三次。

  测试方法参照5.2.2,先以100%流动相A,0.2 mL/min平衡系统,基线设置梯度程序,启动程序采集检测器信号,记录谱图并保存。然后在谱图上读取基线%响应信号处)对应的时间t(min),按照公式(5-3)计算梯度系统延迟体积。

  色谱工作站一套,带 20uL 样品环(对于 UHPLC,选择 1uL 样品环)的手动进样阀一个(配自动进样器则不需要),合适规格的注射器一支(配自动进样器则不需要),C18 色谱柱一支(理论塔板数不低于 18000)或阻尼管;试样参见表 6;流动相为 85%甲醇水溶液(样品色谱峰保留因子 k 值不低于 3)或纯水。

  仪器整机系统(包括恒流泵、检测器、色谱柱、进样系统、色谱工作站等)连接好,按照仪器系统配置的检测器类型选择流动相等测试条件和参数,见表3和表6。 以85%甲醇水溶液为流动相,流量为1.0 mL/min,基线 L相应的试样,记录保留时间和峰面积,连续7次。

  分别将保留时间、峰面积测试数据代入式(5-4)计算定性、定量重复性RSD值。

  测试方法参照5.5.2,基线稳定后注入相应的试样,采集谱图,记录色谱图中试样的峰高和基线噪声,重复三次取平均值。然后按式(5-5)、(5-6)计算,作为仪器的检出限(S/N=3)与定量限(S/N=10)。

  测试方法参照5.5.2,基线稳定后,由低到高,依次注入10个不同浓度相应的试样,采集谱图,每个浓度重复测试三次,取算术平均值。以前五个浓度点和对应峰面积作标准曲线,计算出后五点的理论峰面积,与对应含量的峰面积比较,峰面积刚好大于计算值5%时,认为曲线弯曲,此点浓度作为线测得的检测限作为线性下限CL。最后,由CH/CL算出检测器线 配置不同检测器时试样的选择

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